穎泰三號主要成分是枯草芽孢桿菌及產(chǎn)生的枯草菌肽抗菌肽，枯草菌肽由37個(gè)氨基酸組成，結構中含有兩個(gè)α-螺旋、一個(gè)連接環(huán)和兩個(gè)二硫鍵。其成分明確，結構清晰，可有效殺滅產(chǎn)氣莢膜梭菌、金黃色葡萄球菌和化膿性鏈球菌等革蘭氏陽(yáng)性菌。
通過(guò)不同方法檢測穎泰三號和其他同類(lèi)芽孢桿菌產(chǎn)品的抑菌性能，評估不同產(chǎn)品對產(chǎn)氣莢膜梭菌和金黃色葡萄球菌等革蘭氏陽(yáng)性菌的抑菌效果，為飼料廠(chǎng)在替代抗生素方面的應用提供參考依據。
試驗目的：
試驗方法：參照藥典方法，分別取0.1mL產(chǎn)氣莢膜梭菌CVCC2027、金黃色葡萄球菌CMCC26003細菌菌液，加入含10mL LB液體培養基的滅菌試管中，再將制備好的3個(gè)待測樣品溶液分別按照1%、3%、6%的濃度（0.1mL、0.3mL、0.6mL）加入前述試管中。同時(shí)設立空白對照（試管內只加LB液體培養基和細菌菌液）。
37℃培養，24小時(shí)后測定各試管菌液OD600nm（用LB培養基調零），記錄、計算各產(chǎn)品不同濃度下的抑菌率。
抑菌率=（A空-A樣）/A空*100%
A樣：樣品組24h OD值。
試驗結果如下：
圖1.2 穎泰三號對2種細菌的抑菌效果
圖1.4 進(jìn)口枯草芽孢桿菌對2種細菌的抑菌效果
結論：
試驗方法：將3個(gè)樣品益生菌活化，于LB培養基中37℃培養16h，之后將各產(chǎn)品發(fā)酵液離心，取其上清液，用無(wú)菌水2倍梯度稀釋依次制備成1/2、1/4、1/8、……、1/256的樣品溶液，備用。
將各細菌菌液加入到TSC培養基中，之后倒入放有牛津杯的素瓊脂培養皿中，取出牛津杯，吸取150μL不同濃度的各樣品溶液加入到相應的孔內，同時(shí)設立滅菌水為空白對照，并在培養皿上做好標記。
將加過(guò)樣的培養皿移入37℃培養箱中培養16h，測量、記錄抑菌圈。
3種產(chǎn)品對不同產(chǎn)氣莢膜梭菌的MIC：
表2.2 穎泰三號和其他芽孢桿菌產(chǎn)品對5種產(chǎn)氣莢膜梭菌的MIC
圖2.2 不同產(chǎn)品對豬產(chǎn)氣莢膜梭菌1的抑菌圈
圖2.3 不同產(chǎn)品對豬產(chǎn)氣莢膜梭菌2的抑菌圈
圖2.4 不同產(chǎn)品對雞產(chǎn)氣莢膜梭菌1的抑菌圈
圖2.5 不同產(chǎn)品對雞產(chǎn)氣莢膜梭菌2的抑菌圈
結論：
注：以上數據均來(lái)自農業(yè)農村部飼用抗生素替代技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗室。
撰稿：成鵬、李洪宇
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