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數據以mean±SD表示(n=3)，無(wú)共同字母的數據差異有統計學(xué)意義(P<0.05)。SOD：超氧化物歧化酶；MDA：丙二醛；T-AOC：總抗氧化能力。

2、日糧中免疫抗體對腸道免疫相關(guān)基因表達的影響

由圖1可見(jiàn)，草魚(yú)腸道中錳超氧化物歧化酶（MnSOD）、促炎細胞因子（IL-1β）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白細胞介素8（IL8）、白細胞介素10（IL10）和轉化生長(cháng)因子β（TGF-β）的表達水平。MnSOD各組無(wú)顯著(zhù)差異（圖1a）和IL8的表達水平（圖1c）在所有組之間無(wú)顯著(zhù)差異（P>0.05），但M3的表達水平在所有組中最高。TNF-α的mRNA水平（圖1d）在M3中達到峰值（P<0.05）。與其它組相比，M3組IL-1β的表達水平（圖1b）顯著(zhù)上調（P<0.05）。隨著(zhù)添加量增加，IL10和TGF-β在草魚(yú)腸道中的表達均先降低，然后緩慢增加，在M3組中達到最低表達水平。IL10的表達水平（圖1e）和TGF-β（圖1f）在M3組中的表達水平與其它組相比顯著(zhù)下調（P<0.05）。圖1（g–k）顯示嗜水氣單胞菌攻擊后，所有組的腸中IL-1β、IL8、TNF-α、IL10和TGF-α的mRNA水平。與對照組相比，添加抗菌肽組M0-Ah中IL-1β的表達水平顯著(zhù)增加（P<0.05）。與M0-M2相比，M3、M4和M5IL8（圖1h）和TNF-α（圖1i）的表達有顯著(zhù)下調趨勢（P<0.05）。IL10的mRNA水平?jīng)]有顯著(zhù)差異（圖1j）在所有組之間（除M1-Ah外）（P>0.05）。草魚(yú)腸道中，TGF-β的表達水平（圖1k）在M3-Ah達到峰值，與其他組相比有顯著(zhù)差異（P<0.05）。

圖1.飼喂AMP (a-e)和攻毒嗜水單胞菌(g-k)后草魚(yú)腸道免疫相關(guān)基因的表達結果針對β-肌動(dòng)蛋白歸一化。數據以mean±SD表示(n = 3)。

3、腸道微生物區系的優(yōu)勢細菌類(lèi)群

3.1 腸道菌群的多樣性和豐富性

各組Shannon、Simpson、Chao和Ace指數沒(méi)有顯著(zhù)差異（圖2a-d），而在Shannon指數中，NC組和M5-Ah與M0-Ah相比，顯著(zhù)增加（圖2e）；在A(yíng)ce指數（圖2g）和Chao（圖2h）指數中，與NC組相比，M2-Ah、M3-Ah和M4-Ah顯著(zhù)降低。β多樣性分析的結果可以反映物種組成在不同類(lèi)群中的分布。因此，不同樣本中微生物群落的相似性或差異性可以使用主坐標分析（PCoA）來(lái)識別，這是β多樣性分析之一（圖2ij）。結果（圖2i）顯示，在從M0中分離出來(lái)的所有添加抗菌肽組（M3除外）中都有一些相似的組成，圖2j顯示了M1至M5-Ah中比M0和NC組更多的重疊元素。

圖2.各組腸道菌群的多樣性和豐富性

圖3.通過(guò)單因素方差分析比較六組腸道菌群的相對豐度

(a):門(mén)水平;(b):各組植物菌的相對豐度;(c): M0和M1的相對豐度;(d) M0和M2的相對豐度;(c): M0和M3的相對豐度;(d): M0和M4的相對豐度;(e): M0和M5的相對豐度。

圖4.通過(guò)單因素方差分析比較嗜水單胞桿菌攻毒組腸道菌群的相對豐度

(a):門(mén)水平;(b): NC和M0-Ah的相對豐度;(c): NC和M1-Ah的相對豐度;(d) NC和M2-Ah的相對豐度;(e): NC和M3-Ah的相對豐度;(f): NC和M4-Ah的相對豐度;(g): NC和M5-Ah的相對豐度;(h): M0-Ah和M1-Ah的相對豐度;(i): M0-Ah和M2-Ah的相對豐度;(j) M0-Ah和M3-Ah的相對豐度;(k): M0-Ah和M4-Ah的相對豐度;(l): M0-Ah和M5-Ah的相對豐度。

3.4 腸道菌群組成與免疫相關(guān)基因的相關(guān)性研究

如圖5所示，螺旋體門(mén)和異常球菌-棲熱菌門(mén)的相對豐度與IL-1β、MnSOD和TNF-α的表達水平呈顯著(zhù)正相關(guān)（P<0.05），而藍藻門(mén)和硝化螺旋菌門(mén)分別與IL10和IL-1β的表達水平呈明顯正相關(guān)（P<0.05）。此外，變形菌門(mén)和異常球菌-棲熱菌門(mén)的相對豐度與IL8的mRNA表達水平之間存在顯著(zhù)的正相關(guān)關(guān)系（P<0.05）。圖5b顯示，梭桿菌和衣原體的相對豐度與IL-1β的mRNA表達水平呈顯著(zhù)正相關(guān)（P<0.05），但是，與酸桿菌和軟壁菌門(mén)呈顯著(zhù)負相關(guān)（P<0.05），髕骨細菌門(mén)與IL8呈負相關(guān)。

圖5.免疫防御系統相關(guān)基因與培養組(a)和攻毒組(b)腸道微生物相對豐度在門(mén)水平上的相關(guān)性Pearson相關(guān)系數由不同顏色體現(青色黑色:正相關(guān);紫色:負相關(guān))。

本研究表明，在飼料中添加400~800 mg/kg的抗菌肽可以改善草魚(yú)腸道結構，增加草魚(yú)腸道菌群的多樣性。此外，抗菌肽還能抑制某些致病菌，如嗜水氣單胞菌，增加厭氧菌數量，提高腸道對營(yíng)養物質(zhì)的吸收能力。但極高的劑量會(huì )抑制腸道消化、營(yíng)養吸收能力和微生物多樣性。抗菌肽已被應用于水產(chǎn)養殖以增強健康，但其與水生生物腸道菌群的相互作用還有待進(jìn)一步探索。